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[发明专利]一种类泛素修饰蛋白底物鉴定方法-CN201510288478.3有效
发明人：朱莹;许国强 -专利权人：苏州大学
申请日： 2015-05-29 - 公布日： 2019-04-26 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及一种类泛素修饰蛋白底物鉴定方法，该方法首先构建带有亲和标签的类泛素修饰结合酶与类泛素修饰蛋白融合基因表达质粒，然后将所述融合基因表达质粒转染到真核细胞中，48或72小时后收集细胞并裂解，获得全蛋白裂解液，通过亲和标签分离纯化类泛素修饰蛋白底物，进一步通过胰蛋白酶酶解类泛素修饰蛋白底物，提取纯化多肽，利用质谱分析鉴定修饰底物多肽，搜索数据库获得多肽序列，比对对照样品和修饰底物的分子量变化最终确证类泛素修饰蛋白底物，本发明通过表达类泛素修饰结合酶和类泛素修饰蛋白的融合蛋白来提高类泛素修饰蛋白对底物蛋白的修饰程度，并通过亲和层析提高对底物蛋白的分离效率，可更可靠地确证类泛素修饰蛋白的底物。
种类修饰蛋白鉴定方法

[发明专利]产生基于类泛素或泛素蛋白的生化工具的方法-CN202111301856.9在审
发明人：刘磊;王天;王玫景;何伟;李春瞳;李景虹 -专利权人：清华大学
申请日： 2021-11-04 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明提供了产生用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具的方法，包括：在蛋白酶Lbpro的存在下，使成熟化类泛素或泛素蛋白或其变体与甘氨酰化工具分子接触，从而获得所述用于评价类泛素或泛素蛋白去修饰酶活性的生化工具
产生基于类泛素蛋白生化工具方法

[发明专利]一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法-CN202211119498.4有效
发明人：冯宇驰;李维捷;徐朋奇;张影;何俊 -专利权人：深圳粒影生物科技有限公司
申请日： 2022-09-14 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，包括以下步骤：(1)表达纯化得到突变型泛素或类泛素蛋白；所述突变型泛素的C末端为半胱氨酸，所述突变型类泛素蛋白的C末端甘氨酸对应的核苷酸序列突变为半胱氨酸对应的核苷酸序列；(2)表达纯化得到突变型的组蛋白八聚体；所述突变型的组蛋白八聚体在进行泛素化/类泛素化修饰位点上的赖氨酸突变为半胱氨酸；(3)利用化学交联剂，将突变型泛素或类泛素蛋白与突变型组蛋白八聚体在非变性条件下进行交联反应该方法利用化学交联方法直接在组蛋白八聚体水平上进行体外构建泛素化/类泛素化组蛋白八聚体。
一种利用化学交联制备纯化泛素化类泛素化组蛋白八聚体方法

[发明专利]一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法及其应用-CN201310752040.7在审
发明人：张春阳;杨用 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法，该方法将表达待测蛋白质的重组质粒以及表达带四半胱氨酸多肽标签的类泛素化修饰蛋白的重组质粒共转染宿主细胞进行蛋白质的类泛素化修饰，然后进行蛋白质纯化、双砷染料标记、并对待测蛋白质的类泛素化修饰进行检测和待测蛋白质的多聚类泛素化修饰的修饰程度进行量化分析；该方法灵敏度高，简单易行。此外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测质粒及其制备方法；另外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测试剂盒。
一种蛋白质类泛素化修饰检测方法及其应用

[发明专利]新型标签蛋白及其应用-CN200810036879.X有效
发明人：杨淑伟;魏星 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2008-04-30 - 公布日： 2009-11-04 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达目的蛋白的方法，所述方法包括在宿主细胞中表达亮氨酸拉链1、类泛素分子羧基端区域和目的蛋白的融合蛋白；将所述的融合蛋白与含有类泛素分子氨基端区域和亮氨酸拉链2的类泛素分子重建蛋白混合，生成重建产物，用类泛素分子的特异性蛋白酶处理该重建产物，从而获得所述的目的蛋白。本发明还公开了一种用于目的蛋白表达的试剂盒，所述的试剂盒含有：用于表达目的蛋白的构建物，其含有亮氨酸拉链1的编码基因和类泛素分子羧基端区域的编码基因；以及类泛素分子重建蛋白或重建构建物。
新型标签蛋白及其应用

[发明专利]一种人重组乙型干扰素的制备方法-CN201410141118.6在审
发明人：李华平;张金阔;钱柳青;范名俊;朱苗苗 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2014-04-09 - 公布日： 2015-10-14 - 主分类号： C07K14/565 文献下载
摘要：本发明涉及一种具体涉及一种人重组乙型干扰素的高效制备方法，所述方法包括：通过将亮氨酸拉链1、类泛素修饰分子羧基端与乙型干扰素融合，并在酵母系统高效表达，获得亮氨酸拉链1-类泛素修饰分子羧基端-乙型干扰素融合蛋白；将所述的融合蛋白，与类泛素修饰分子氨基端-亮氨酸拉链2蛋白分子混合，亮氨酸拉链1与亮氨酸拉链2可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体，从而使得类泛素修饰分子羧基端与类泛素修饰分子氨基端重组成为完整的类泛素分子重建物，用类泛素修饰分子特异性蛋白酶处理该重建物，从而获得与自然人乙型干扰素结构和功能相似的重组人乙型干扰素。
一种重组干扰素制备方法

[发明专利]一种人重组乙型干扰素的制备方法-CN202010754439.9在审
发明人：李华平;张金阔;钱柳青;范名俊;朱苗苗 -专利权人：广州复能基因有限公司
申请日： 2014-04-09 - 公布日： 2020-11-27 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种人重组乙型干扰素的高效制备方法，所述方法包括：通过将亮氨酸拉链1、类泛素修饰分子羧基端与乙型干扰素融合，并在酵母系统高效表达，获得亮氨酸拉链1‑类泛素修饰分子羧基端‑乙型干扰素融合蛋白；将所述的融合蛋白，与类泛素修饰分子氨基端‑亮氨酸拉链2蛋白分子混合，亮氨酸拉链1与亮氨酸拉链2可相互作用形成亮氨酸拉链二聚体，从而使得类泛素修饰分子羧基端与类泛素修饰分子氨基端重组成为完整的类泛素分子重建物，用类泛素修饰分子特异性蛋白酶处理该重建物
一种重组干扰素制备方法

[发明专利]一种从蛋白乳中提取泛素及类泛素的方法-CN201610084696.X在审
发明人：赵金梁;赵发 -专利权人：天津替代医学科技股份有限公司
申请日： 2016-02-15 - 公布日： 2016-06-01 - 主分类号： C07K14/415 文献下载
摘要：一种从蛋白乳中提取泛素及类泛素的方法。本发明为生物技术领域，是一种从动物或植物的蛋白乳中提取泛素和类泛素的方法：将植物热磨制浆，或者将动物的组织、皮、肉清洗、绞碎后湿磨制浆，离心分离，得到的蛋白乳加热后过滤，得到粗提液和沉淀；将沉淀清洗后再次过滤，所得滤液与粗提液合并，加入活性炭搅拌后除去活性炭，得到的上清液经离心机分离，得到的固相进行喷雾干燥，得到泛素及类泛素，得到的液相与前述蛋白乳合并，再次提取。该方法工艺流程短，操作简单，不引入不安全物质，减少能源消耗，同时综合利用动物或植物，制得的泛素和类泛素可应用在医药、保健品等领域。
一种蛋白乳中提取类泛素方法

[发明专利]一种蛋白质类泛素化修饰位点鉴定方法-CN201210398526.0有效
发明人：王立顺;汪彤丹;余韵;韩冰 -专利权人：上海交通大学医学院附属瑞金医院
申请日： 2012-10-18 - 公布日： 2014-05-07 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明涉及一种蛋白质类泛素化修饰位点鉴定方法，该特异性富集标记鉴定方法首先是对纯化后的类泛素化修饰蛋白质进行酶解，通过特异性类泛素化抗体富集类泛素化修饰的酶切肽段，随后利用化学标记对所富集肽段中的非修饰化的赖氨酸氨基残基进行保护，并经去泛素化酶催化反应以裸露出底物肽段序列上被修饰的赖氨酸，经液相色谱串联质谱联用仪分析肽段序列，通过蛋白质质谱数据分析软件匹配得到被化学修饰的肽段序列，其序列中含有游离氨基的赖氨酸位点即为类泛素化修饰位点与目前常用的基因突变方法获得位点方式比较，本发明的优点是无需繁琐的基因突变技术手段即可快速、高效、准确地得到蛋白质类泛素化修饰位点信息。
一种蛋白质类泛素化修饰鉴定方法

[发明专利]Necrosulfonamide在制备降低泛素类蛋白水平的药物中的应用-CN202211501327.8在审
发明人：张志刚;屠洁 -专利权人：中国科学院深圳先进技术研究院
申请日： 2022-11-28 - 公布日： 2023-03-21 - 主分类号： A61K31/497 文献下载
摘要：本发明涉及Necrosulfonamide在制备降低泛素类蛋白水平的药物中的应用。研究发现，N‑[4‑[[(3‑甲氧基吡嗪基)氨基]磺酰基]苯基]‑3‑(5‑硝基‑2‑噻吩基)‑2‑丙烯酰胺能够降低泛素类蛋白水平。科学、严谨的试验验后，提供一种Necrosulfonamide、Necrosulfonamide的药可用盐、Necrosulfonamide的溶剂化物或Necrosulfonamide衍生物在制备降低泛素类蛋白水平的药物中的应用经试验，发现体外细胞在necrosulfonamide作用下，泛素单体及多泛素修饰的蛋白显著下降，有潜力应用于临床治疗精神分裂症。
necrosulfonamide 制备降低泛素类蛋白水平药物中的应用

[发明专利]一种类泛素修饰蛋白及其制备和应用-CN201210152370.8无效
发明人：孙黎;汪玮 -专利权人：中国科学院海洋研究所
申请日： 2012-05-16 - 公布日： 2012-09-19 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：本发明涉及分子生物学领域，具体是一种半滑舌鳎类泛素修饰蛋白及其制备和应用。类泛素修饰蛋白为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物连接表达载体后得质粒pETG15，将其转化Rosetta(DE3)，获得RG15，经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后，利用亲和层析柱纯化重组蛋白，即为类泛素修饰蛋白所述类泛素修饰蛋白具有显著的抗病毒作用。
种类修饰蛋白及其制备应用

[发明专利]从动物提取泛素及类泛素的方法-CN201410071665.1无效
发明人：赵金梁;赵发 -专利权人：天津替代医学科技有限公司
申请日： 2014-02-28 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： C07K1/30 文献下载
摘要：本发明公开了一种从动物提取泛素及类泛素的方法，包含如下步骤：首先将节肢动物、环节动物、刺胞动物、可食用鱼类或家禽的组织、皮、肉及家畜的组织、皮、肉清洗干净，得到原料；然后将原料绞碎后湿磨，得到浆液；混匀浆液将所述上清液浓缩至原体积的1/10～1/25，得到蛋白浓缩液；加入乙醇，静置后离心收集沉淀；用Tris-Gly缓冲液溶解沉淀配成溶液，将溶液经两次过滤收集分子量在6000～14000之间的截留液，即所述泛素及类泛素该方法生产工艺简单、成本低，能制得安全性高、营养价值好的泛素及类泛素产品。
动物提取类泛素方法

[发明专利]一种用于研究细菌中类泛素系统的试剂盒及其应用-CN201810265138.2有效
发明人：徐西兵;沈国民;曹青;沈滟 -专利权人：河南科技大学
申请日： 2018-03-28 - 公布日： 2021-02-09 - 主分类号： C12Q1/25 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于研究细菌中类泛素系统的试剂盒及其应用，属于生物学技术领域。ThiF蛋白具有连接酶的功能，在体外，在存在ATP时，可以将ThiS蛋白连接到底物蛋白上，形成类泛素化修饰，并且这种类泛素化修饰具有底物选择性，FtsA和PriC能够被ThiS蛋白和ThiF蛋白修饰，而本发明的试剂盒可以有效的研究底物的类泛素化修饰情况，方便快捷效率高。
一种用于研究细菌中类泛素系统试剂盒及其应用

[发明专利]从植物中提取泛素及类泛素的方法-CN201410071662.8无效
发明人：赵金梁;赵发 -专利权人：天津替代医学科技有限公司
申请日： 2014-02-28 - 公布日： 2014-05-14 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种从植物中提取泛素及类泛素的方法，包含如下步骤：1）将植物根茎、叶、种子或果实经清洗、消毒、洗涤去除消毒剂，得到原料；2）将原料粉碎，使其满足胶体磨的使用条件；3）若原料是植物种子，那么先经浸泡再用胶体磨进行湿磨叶或果实则直接进行湿磨，得到植物粗浆液；4）利用纤维素酶处理植物粗浆液，得到粗浆处理液；5）将粗浆处理液细磨为细浆；6）将细浆离心分离，收集上清液得到粗蛋白液；7）将粗蛋白液多次用不同孔径膜过滤，得到泛素及类泛素该方法工艺简单，操作过程中不引入不安全物质，减少能源消耗；同时综合利用植物；其制得的蛋白质即泛素及类泛素，具有较高的利用价值。
植物提取类泛素方法

[发明专利]一种修饰泛素并抑制泛素化通路的方法-CN202010067593.9有效
发明人：朱永群;周艳;黄春峰;阎芙洁 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-01-20 - 公布日： 2022-01-04 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种修饰泛素并抑制泛素化通路的方法。该修饰是由革兰氏阴性菌中由III型分泌系统分泌的效应蛋白家族实现的。该家族的效应蛋白是一类二磷酸腺苷(ADP)核糖基转移酶，特异性地对真核生物内泛素分子第66位的苏氨酸残基进行单ADP核糖基化修饰，并且对类泛素蛋白SUMO和NEDD8无修饰作用。这种对泛素的修饰作用不能被真核细胞内去ADP核糖基化修饰的水解酶可逆地去修饰，从而有效破坏了宿主细胞内泛素介导的信号通路，该方法将在杀死肿瘤细胞以及改变细胞信号通路等发挥重要作用。
一种修饰抑制泛素化通路方法

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